Продажа квадроциклов, снегоходов и мототехники
second logo
Пн-Чт: 10:00-20:00
Пт-Сб: 10:00-19:00 Вс: выходной

+7 (812) 924 3 942

+7 (911) 924 3 942

Белок В5 вируса коровьей оспы влияет на гликозилирование, локализацию и стабильность белка А34

  • Список журналов
  • Джей Ген Вирол
  • PMC3052527

Дж Ген Вирол. 2010 июль; 91 (часть 7): 1823–1827 гг.

doi: 10.1099/vir.0.020677-0

Информация об авторе Примечания к статье Информация об авторских правах и лицензии Отказ от ответственности двумя липидными бислоями. Наружная мембрана EEV содержит не менее шести вирусных белков. Среди них A34, мембранный гликопротеин типа II, и B5, мембранный гликопротеин типа I, образуют комплекс и участвуют в таких процессах, как морфогенез и проникновение EEV. A34 необходим для нормального включения B5 в мембрану EEV. Здесь мы использовали вирус без B5 и вирусы с мутациями в проксимальной области ножки мембраны B5 и рассмотрели влияние этих модификаций на A34.

Представленные данные показывают, что B5 необходим для правильного гликозилирования, транспорта и стабильности A34, подчеркивая сложные взаимодействия и взаимную зависимость этих белков коровьей оспы EEV.

Вирус коровьей оспы (VACV) является прототипом представителя рода Orthopoxvirus из Poxviridae. Он реплицируется в цитозоле и производит несколько типов инфекционных вирионов (Smith et al. , 2002; Condit et al. , 2006; Roberts & Smith, 2008). Первым инфекционным потомством является внутриклеточный зрелый вирус (IMV), который окружен однолипидной оболочкой (Dales & Siminovitch, 1961; Hollinshead et al. 9).0020, 1999) и остается в клетке до лизиса клетки. Однако некоторые IMV транспортируются через микротрубочки к ранним эндосомам или транс сети Гольджи, где они окутаны двумя клеточными мембранами, содержащими несколько белков VACV. Полученный внутриклеточный вирус с оболочкой (IEV) затем транспортируется на микротрубочках к поверхности клетки, где внешняя мембрана сливается с плазматической мембраной, чтобы экстернализировать вирус с двойной оболочкой путем экзоцитоза.

Этот вирион называется вирусом с оболочкой, ассоциированным с клеткой (CEV), если он остается на поверхности клетки, или вирусом с внеклеточной оболочкой (EEV), если он высвобождается из клетки. Наружная мембрана CEV/EEV содержит не менее шести вирусных белков: A33 (Roper и др. , 1996), A34 (Duncan & Smith, 1992), A56 (Shida, 1986), B5 (Engelstad и др. , 1992; Wolffe и др. , 1993), F13 (Blasco & Moss, 1991) и K2 (Turner & Moyer, 2006; Wagenaar & Moss, 2007). А34 представляет собой трансмембранный белок типа II с различными гликоформами от 23 до 28 кДа, а его внеклеточная часть содержит лектиноподобный домен С-типа (Duncan & Smith, 1992). Точечная мутация K151D в штамме Western Reserve (WR) A34 ВОВ, которая естественным образом присутствует в штамме J Международного департамента здравоохранения ВОВ (IHD)-J, вызывала увеличение высвобождения EEV (Blasco 9).0019 и др.
, 1993). Точно так же делеция гена A34R (vΔA34R) из VACV WR вызывала 25-кратное увеличение EEV, но такой EEV имел пятикратное снижение специфической инфекционности (McIntosh & Smith, 1996). Делеция или супрессия гена A34R вызывает фенотип малых бляшек (Duncan & Smith, 1992; McIntosh & Smith, 1996), неспособность образовывать актиновые хвосты (Wolffe et al. , 1997; Sanderson et al. , 1998 г.) и сильное ослабление (McIntosh & Smith, 19 лет).96).

B5 представляет собой трансмембранный гликопротеин типа I с молекулярной массой 42 кДа (Engelstad et al. , 1992; Isaacs

et al. , 1992) с внеклеточным доменом, состоящим из четырех коротких консенсусных повторов (SCR), характерных для белков контроля комплемента (Takahashi -Nishimaki и др. , 1991), хотя нет доказательств того, что B5 регулирует активность комплемента. После SCR B5 имеет кислый стебель (ST) перед трансмембранным доменом (TM) и короткий цитоплазматический хвост (CT). И SCR, и CT незаменимы для нацеливания B5 на мембрану EEV (Herrera и др. , 1998 г.; Лоренцо и др. , 1998 г.; Мэтью и др. , 1998), хотя последний влияет на его транспорт к клеточной поверхности (Mathew et al. , 2001) и рециркуляцию через эндосомы (Ward & Moss, 2000). B5 необходим для обертывания IMV с образованием IEV (Engelstad & Smith, 1993; Wolffe et al. , 1993). B5 и A34 взаимодействуют (Rottger et al. , 1999; Earley et al. , 2008; Perdiguero et al. , 2008; Roberts
).и другие.
, 2009), а в отсутствие A34 количество B5, включенного в EEV, заметно снижается (Earley et al. , 2008; Perdiguero et al. , 2008; Roberts et al. , 2009). B5 и A34, каждый, влияют на зависимый от гликозаминогликанов (GAG) разрыв внешней мембраны EEV во время проникновения EEV (Law et al. , 2006; Roberts et al. , 2009).

Хотя B5 экспрессируется сам по себе, его профиль клеточной локализации очень похож на профиль, наблюдаемый в контексте вирусной инфекции (Katz и др. , 1997; Лоренцо и др. , 2000), для А34 это не так. В инфицированных клетках А34 обнаруживается в аппарате Гольджи, на клеточной поверхности и в CEV/EEV. Напротив, когда он экспрессируется отдельно, он накапливается в перинуклеарной области и не достигает плазматической мембраны (Lorenzo et al. , 2000). Кроме того, попытки экспрессировать A34 самостоятельно из классических эукариотических векторов экспрессии (pcDNA3, pCI) и в нескольких рекомбинантных системах экспрессии дали низкие уровни экспрессии. Например, в системе, где растворимые формы белков EEV А56, В5 и А33 экспрессировались в клетках СНО и секретировались в среду, выход, полученный для А34, был примерно в 20 раз ниже, чем для В5 (закон 9).0019 и др.

, 2005 г.; Пютц и др. , 2005 г.; М. Закон (неопубликованные данные). Здесь мы представляем данные, показывающие, что в отсутствие B5 уровень A34 заметно снижается, скорее всего, из-за неправильной укладки и последующей деградации.

В недавнем исследовании проникновения EEV мы создали несколько мутантов VACV с изменениями кислотных остатков стебля B5 (Roberts et al. , 2009), структуру этих мутантов см. на рис. . Используя эти вирусы, мы проанализировали лизаты инфицированных клеток RK13 с помощью иммуноблоттинга с мышиными моноклональными антителами (mAb) против B5 (36-6; Roberts 9).0019 и др.

, 2009), A34 (34-1; Roberts et al. , 2009) и белок IMV D8 (AB1.1; Parkinson & Smith, 1994) в качестве инфекционного контроля (рис.  ). Мышиные mAb против белков A34 и B5 получали путем иммунизации мышей очищенным рекомбинантным белком, экспрессированным из клеток млекопитающих (Law et al. , 2005; Pütz et al. , 2005). Как отмечалось ранее, эти мутации влияют на электрофоретическую подвижность B5 (Roberts et al. , 2009). Кроме того, этот анализ показал, что в отсутствие В5 количество А34 в инфицированных клетках было значительно снижено, а у некоторых мутантов В5 профиль гликозилирования А34 был другим. Когда B5 был делетирован, наблюдалась одна отчетливая полоса около 20 кДа (A34*) вместо полос 23–28 кДа, создаваемых вирусом дикого типа (WT). Напротив, удаление всех B5 SCR (vSCR0) не имело эффекта, и A34 сохранил профиль WT (обратите внимание, что оставшийся фрагмент B5 не был виден из-за его небольшого размера).
Однако замена кислотных остатков стебля аланинами (vST2-35ala) имела тот же эффект, что и удаление B5. Более того, замена пяти ближайших к мембране кислотных остатков (vST23-35ala) также приводила к профилю A34*. Интересно, что vST2-16 и vST28-35 показали смешанный профиль с полосой A34*, очевидной вместе с формами с более высокой молекулярной массой (рис. ). Поскольку vST23-35ala и vST28-35ala различаются только по остатку 23 и демонстрируют различные профили гликозилирования A34, мы задались вопросом, может ли эта аминокислота сама по себе влиять на гликозилирование A34. Для решения этой проблемы был сконструирован рекомбинантный VACV, в котором аспарагиновая кислота 23 стебельчатой ​​области была заменена на аланин (vST23ala), с использованием транзиентной доминантной селекции, как описано ранее (Roberts 9).0019 и др.
, 2009 г.). При тестировании с помощью иммуноблоттинга, как указано выше, vST23ala показал тот же профиль A34, что и вирус WT, и, следовательно, мутация аспарагиновой кислоты 23 недостаточна для изменения гликозилирования A34 (рис.  ). В целом, анализ этих мутантов показал, что стебель B5 важен для правильного гликозилирования A34.

Открыть в отдельном окне

B5 влияет на обилие и размер A34. ( а ) Структура мутантов стебля B5, использованных в этом исследовании. Аминокислотные остатки стебля пронумерованы от 1 до 39.и модифицированные остатки показаны жирным шрифтом. (До нашей эры). Клетки RK13 инфицировали указанными вирусами, и клеточные лизаты готовили через 16  ч после инфицирования (p.i.) и подвергали иммуноблотингу с mAb против B5, D8 и A34. Положения маркеров молекулярной массы показаны слева в кДа.

Для уточнения природы изоформы А34 20 кДа использовали препараты, влияющие на гликозилирование: туникамицин, ингибитор

N -ацетилглюкозаминтрансферазы и кифуненсин, ингибитор α -маннозидаза I (рис. ). Клетки RK13 инфицировали WR или vΔB5R в количестве 5 p.f.u. на клетку в течение 90  мин, а затем инкубировали в течение ночи в модифицированной Дульбекко среде Игла, содержащей 2,5% фетальной бычьей сыворотки с 1 мкМ туникамицина или 5 мкМ кифунензина или без них. Затем были приготовлены клеточные лизаты и проанализированы с помощью иммуноблоттинга (рис. ). Обработка WR-инфицированных клеток туникамицином давала одну полосу А34, соответствующую негликозилированному полипептиду (А34 мкг ). А34 уг прогнозируется как 19,6 кДа (Duncan & Smith, 1992), и мы наблюдали немного меньшую полосу около 17 кДа. В клетках, инфицированных vΔB5R, A34 немного крупнее, чем A34
мкг
, и все еще уменьшается в размере в присутствии туникамицина, что указывает на то, что A34* представляет собой частично гликозилированную форму. Примечательно, что уровни B5 и A34 снижались в присутствии туникамицина, что указывает на то, что гликозилирование необходимо для стабильности этих белков. В присутствии кифунензина в клетках, инфицированных WR, наблюдалась картина A34*, что позволяет предположить, что A34* представляет собой промежуточное соединение с девятью остатками маннозы (Man 9 ), перед обрезкой α -маннозидазами.

Открыть в отдельном окне

В отсутствие B5 A34 имеет аберрантное гликозилирование и подвергается деградации. ( а ) Упрощенная схема пути гликозилирования, показывающая, где действуют туникамицин и кифунензин. Глюк, глюкоза; GlcNAc, N -ацетилглюкозамин; Мужик, манноза. (b) Клетки RK13 инфицировали WR и vΔB5R и инкубировали с туникамицином (Tunic.) или кифунензином (Kifu.) или без них. Через 16 часов после инъекций получали клеточные лизаты и анализировали их иммуноблоттингом с анти-B5, анти-D8 и анти-A34 mAb. Для наглядности показано еще одно изображение нижней части мембраны. А34 мкг и В5 мкг , негликозилированный А34 и негликозилированный В5. (c) A34 синтезируется в отсутствие B5, но со временем разлагается. Клетки RK13 инфицировали WR или vΔB5R и собирали в указанное время p.i. Клеточные лизаты готовили и анализировали иммуноблоттингом, как в (b). Положения маркеров молекулярной массы показаны слева в кДа.

Другое интересное наблюдение заключалось в том, что количество A34 в отсутствие B5 увеличивалось при лечении кифунензином. Это согласуется с отчетами, показывающими, что обработка α -маннозидазы действуют как сигнал для нацеливания на неправильно свернутые белки для протеасомной деградации, и что ингибирование этих ферментов обработкой кифунензином приводит к накоплению неправильно свернутых (Man 9 ) -гликопротеинов (Olivari & Molinari, 2007). Чтобы решить эту проблему, была исследована стабильность A34 во времени (рис.  ). Клетки RK13 инфицировали WR или vΔB5R, как и ранее, и готовили клеточные лизаты через 4, 8, 12 и 24  ч p.i. и проанализированы методом иммуноблоттинга. Вплоть до 8 часов после инъекций A34 легко обнаруживался в клетках, инфицированных любым вирусом, хотя он был менее распространен в vΔB5R-инфицированных клетках, но после этого A34 существенно снижался в vΔB5R-инфицированных клетках и был едва заметен через 24 ч. Это говорит о том, что синтез и накопление А34 обычно начинается без В5, но по мере того, как скорость синтеза снижается позже во время инфекции, уровень А34 снижается. В совокупности эти данные свидетельствуют о том, что в отсутствие B5 происходит неправильная укладка и деградация A34.

Затем исследовали влияние статуса гликозилирования A34 на субклеточную локализацию. Клетки BSC-1 инфицировали вирусами при 2 б.о.е. на ячейку в течение 8 ч, фиксировали PBS-4 % параформальдегида (PFA) в течение 10 мин на льду, а затем в PBS-8 % PFA в течение 20 мин при комнатной температуре. Фиксированные клетки пермеабилизировали 0,2% раствором Triton X-100 и инкубировали с mAb против A34 и кроличьим антителом против протеиндисульфидизомеразы (anti-PDI; Abcam) для окрашивания эндоплазматического ретикулума (рис.  ). В соответствии с рис.  , значительные уровни A34 присутствовали как в WR-, так и в vΔB5R-инфицированных клетках через 8  ч после заражения. В WR-инфицированных клетках mAb против A34 метили аппарат Гольджи, а также точечные структуры, соответствующие вирионам на периферии, как описано ранее (Lorenzo и др. , 2000), но значительной совместной локализации с PDI не наблюдалось (рис.  ). Напротив, в vΔB5R-инфицированных клетках A34 присутствовал по всей клетке в ретикулярном паттерне, совместно локализованном с PDI (рис.  ), подобно тому, что наблюдается, когда A34 экспрессируется из вектора вируса леса Семлики (Lorenzo et al. , 2000). Окрашивания частиц ВОВ не наблюдалось, и это можно объяснить дефектом обертывания vΔB5R (Engelstad & Smith, 1993; Wolffe et al. , 19).93). Клетки, инфицированные vΔB5R, vST23-35ala и vST28-35ala, показали значительное количество A34 в ER и ядерной оболочке, но vST23-35ala и vST28-35ala также показали некоторое окрашивание вирусных частиц (рис.  ; увеличение точечного окрашивания). представляющие вирионы показаны для изображения vST28-35). Клетки, инфицированные vST23-35ala, обычно имели меньше частиц, чем клетки, инфицированные WR или даже vST28-35ala. Это согласуется с тем фактом, что vST23-35 продуцирует гораздо меньше EEV, чем WR, тогда как продукция EEV vST28-35ala была лишь незначительно снижена (Roberts 9).0019 и др. , 2009 г.). В целом эти данные показывают, что полоса A34* в SDS-PAGE коррелирует с присутствием A34 в ER. Это согласуется с тем, что A34* представляет собой (Man 9 )-A34, который накапливается в ER.

Открыть в отдельном окне

Отсутствие или изменение В5 приводит к накоплению А34 в ЭР. (а, б). Клетки BSC-1 инфицировали в течение 8 часов показанными вирусами, фиксировали и обрабатывали для иммунофлуоресценции с использованием mAb против A34, затем против мышиного Alexa 546 (красный) и против PDI, а затем против кроличьего Alexa 488 (зеленый) . Образцы просматривали на конфокальном микроскопе Zeiss 510 Meta с использованием программного обеспечения Zeiss LSM. Правая панель каждой строки показывает объединенное изображение левой и центральной панелей. Прямоугольники на отдельных панелях показывают области клетки до и после увеличения. Бары, 10 мкМ.

Представленные здесь данные указывают на то, что в отсутствие В5 или в присутствии некоторых мутантных форм В5 А34 не укладывается правильно и накапливается в ER в виде частично гликозилированного промежуточного соединения. В конечном счете, по крайней мере, в случае vΔB5R, это привело бы к протеасомной деградации. Гипотеза, объясняющая эти данные, состоит в том, что взаимодействие отрицательно заряженных кислотных остатков в области стебля B5 с положительными зарядами A34 может помочь A34 приобрести правильную конформацию. В качестве альтернативы, стебель B5 может играть роль в перевозке комплекса B5/A34.

В совокупности с предыдущими данными, показывающими, что A34 необходим для правильного включения B5 в мембрану EEV, это показывает, что существует сложное взаимодействие между этими двумя белками VACV, что затрудняет разгадку их соответствующих ролей в оболочке вируса, выходе и повторный вход из-за их взаимозависимости.

Мы благодарим сотрудников нашей лаборатории за их помощь и поддержку, в частности доктора Гарета Моргана и мистера Майка Холлинсхеда за полезные обсуждения и помощь в микроскопии. Эта работа была поддержана Медицинским исследовательским советом. Г. Л. С. – главный научный сотрудник Wellcome Trust.

  • Бласко, Р. и Мосс, Б. (1991). Образование внеклеточного вируса коровьей оспы и передача вируса от клетки к клетке предотвращаются делецией гена, кодирующего белок наружной оболочки массой 37 000 дальтон. Дж. Вирол 65, 5910–5920. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
  • Бласко, Р., Сислер, Дж. Р. и Мосс, Б. (1993). Диссоциация потомства вируса коровьей оспы от клеточной мембраны регулируется гликопротеином вирусной оболочки: эффект точечной мутации в домене гомологии лектина гена A34R. Дж. Вирол 67, 3319–3325. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
  • Condit, RC, Moussatche, N. & Traktman, P. (2006). В двух словах: структура и сборка вириона коровьей оспы. Adv Virus Res 66, 31–124. [PubMed] [Google Scholar]
  • Дейлс, С. и Симинович, Л. (1961). Развитие вируса коровьей оспы в клетках штамма Earle L по данным электронной микроскопии. J Biophys Biochem Cytol 10, 475–503. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
  • Дункан, С. А. и Смит, Г. Л. (1992). Идентификация и характеристика гликопротеина внеклеточной оболочки, влияющего на выход вируса коровьей оспы. Дж. Вирол 66, 1610–1621. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
  • Earley, A.K., Chan, WM & Ward, BM (2008). Белку B5 вируса коровьей оспы требуется A34 для эффективного внутриклеточного переноса из эндоплазматического ретикулума в место обертывания и включения в вирионы потомства. Дж. Вирол 82, 2161–2169. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
  • Энгельстад, М. и Смит, Г.Л. (1993). Белок оболочки вируса осповакцины массой 42 кДа необходим для оболочки и выхода внеклеточного вируса, а также для вирулентности вируса. Вирусология 194, 627–637. [PubMed] [Google Scholar]
  • Engelstad, M., Howard, S.T. & Smith, G.L. (1992). Конститутивно экспрессируемый ген коровьей оспы кодирует гликопротеин массой 42 кДа, связанный с факторами контроля комплемента, который образует часть внеклеточной оболочки вируса. Вирусология 188, 801–810. [PubMed] [Академия Google]
  • Эррера, Э., Лоренцо, М.М., Бласко, Р. и Исаакс, С.Н. (1998). Функциональный анализ белка B5R вируса коровьей оспы: существенная роль в оболочке вируса не зависит от большой части внеклеточного домена. Дж. Вирол 72, 294–302. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
  • Hollinshead, M., Vanderplasschen, A., Smith, G.L. & Vaux, D.J. (1999). Внутриклеточные зрелые вирионы вируса коровьей оспы содержат только одну липидную мембрану. Дж. Вирол 73, 1503–1517. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
  • Айзекс, С. Н., Вольф, Э. Дж., Пейн, Л. Г. и Мосс, Б. (1992). Характеристика кодируемого вирусом коровьей оспы 42-килодальтонного мембранного гликопротеинового компонента класса I внеклеточной оболочки вируса. Дж. Вирол 66, 7217–7224. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
  • Katz, E., Wolffe, E.J. & Moss, B. (1997). Цитоплазматический и трансмембранный домены белка B5R вируса коровьей оспы нацеливают химерный гликопротеин вируса иммунодефицита человека типа 1 на внешнюю оболочку зарождающихся вирионов осповакцины. Дж. Вирол, 71, 3178–3187. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
  • Лоу, М., Путц, М.М. и Смит, Г.Л. (2005). Исследование терапевтической ценности иммунных к коровьей оспе IgG на модели мышиной пневмонии. Дж. Ген Вирол 86, 991–1000. [PubMed] [Google Scholar]
  • Лоу М., Картер Г. К., Робертс К. Л., Холлинсхед М. и Смит Г. Л. (2006). Лиганд-индуцированное и нефузогенное растворение вирусной мембраны. Proc Natl Acad Sci U S A 103, 5989–5994. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
  • Лоренцо, М. М., Эррера, Э., Бласко, Р. и Айзекс, С. Н. (1998). Функциональный анализ белка B5R вируса коровьей оспы: роль цитоплазматического хвоста. Вирусология 252, 450–457. [PubMed] [Google Scholar]
  • Лоренцо М.М., Галиндо И., Гриффитс Г. и Бласко Р. (2000). Внутриклеточная локализация белков оболочки внеклеточного вируса коровьей оспы, индивидуально экспрессируемых с использованием репликона вируса леса Семлики. Дж. Вирол, 74, 10 535–10 550. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
  • Мэтью Э. , Сандерсон К.М., Холлинсхед М. и Смит Г.Л. (1998). Внеклеточный домен белка B5R вируса коровьей оспы влияет на фенотип бляшек, высвобождение внеклеточного оболочечного вируса и образование внутриклеточного актинового хвоста. Дж. Вирол 72, 2429–2438. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
  • Мэтью, Э. К., Сандерсон, К. М., Холлинсхед, Р. и Смит, Г. Л. (2001). Мутационный анализ белка B5R вируса осповакцины. Дж. Ген Вирол 82, 1199–1213. [PubMed] [Google Scholar]
  • Макинтош, А.А. и Смит, Г.Л. (1996). Гликопротеин A34R вируса коровьей оспы необходим для инфекционности внеклеточного оболочечного вируса. Дж. Вирол 70, 272–281. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
  • Оливари, С. и Молинари, М. (2007). Сворачивание гликопротеинов и роль EDEM1, EDEM2 и EDEM3 в деградации гликопротеинов с дефектом сворачивания. FEBS Lett 581, 3658–3664. [PubMed] [Google Scholar]
  • Паркинсон, Дж. Э. и Смит, Г. Л. (1994). Ген A36R вируса коровьей оспы кодирует белок M r 43–50 K на поверхности вируса с внеклеточной оболочкой. Вирусология 204, 376–390. [PubMed] [Google Scholar]
  • Пердигуэро, Б., Лоренцо, М. М. и Бласко, Р. (2008). Гликопротеин А34 вируса коровьей оспы определяет белковый состав внеклеточной оболочки вируса. Дж. Вирол 82, 2150–2160. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
  • Пютц, М.М., Альберини, И., Мидгли, К.М., Манини, И., Монтомоли, Э. и Смит, Г.Л. (2005). Распространенность антител к вирусу коровьей оспы после вакцинации против оспы в Италии. Дж. Ген Вирол 86, 2955–2960. [PubMed] [Google Scholar]
  • Робертс, К.Л. и Смит, Г.Л. (2008). Морфогенез и диссеминация вируса коровьей оспы. Trends Microbiol 16, 472–479. [PubMed] [Google Scholar]
  • Робертс, К.Л., Брейман, А., Картер, Г.К., Юлз, Х.А., Холлинсхед, М., Лоу, М. и Смит, Г.Л. (2009 г.)). Кислотные остатки в проксимальной к мембране области стебля белка B5 вируса осповакцины необходимы для опосредованного гликозаминогликанами разрушения наружной мембраны внеклеточного вируса с оболочкой. Дж. Ген Вирол 90, 1582–1591. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
  • Roper, R.L., Payne, L.G. & Moss, B. (1996). Гликопротеин оболочки внеклеточного вируса коровьей оспы, кодируемый геном A33R. Дж. Вирол, 70, 3753–3762. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
  • Rottger, S., Frischknecht, F., Reckmann, I., Smith, G.L. & Way, M. (1999). Взаимодействия между мембранными белками IEV вируса коровьей оспы и их роль в сборке IEV и образовании актинового хвоста. Дж. Вирол 73, 2863–2875. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
  • Sanderson, C.M., Frischknecht, F., Way, M., Hollinshead, M. & Smith, G.L. (1998). Роль EEV-специфических белков вируса коровьей оспы в формировании внутриклеточного актинового хвоста и индуцированном низким pH слиянии клеток. Дж. Ген Вирол 79, 1415–1425. [PubMed] [Google Scholar]
  • Шида, Х. (1986). Нуклеотидная последовательность гена гемагглютинина вируса коровьей оспы. Вирусология 150, 451–462. [PubMed] [Академия Google]
  • Smith, G. L., Vanderplasschen, A. & Law, M. (2002). Формирование и функция внеклеточного оболочечного вируса коровьей оспы. Дж. Ген Вирол 83, 2915–2931. [PubMed] [Google Scholar]
  • Такахаши-Нисимаки Ф., Фунахаши С., Мики К., Хасидзуме С. и Сугимото М. (1991). Регуляция размера бляшек и круга хозяев с помощью гена вируса коровьей оспы, связанного с белками системы комплемента. Вирусология 181, 158–164. [PubMed] [Google Scholar]
  • Turner, PC & Moyer, RW (2006). Белки-регуляторы слияния вируса коровьей оспы SPI-3 и гемагглютинин взаимодействуют в инфицированных и неинфицированных клетках. Вирусология 347, 88–99. [PubMed] [Google Scholar]
  • Wagenaar, T. R. & Moss, B. (2007). Ассоциация регуляторных белков слияния вируса коровьей оспы с многокомпонентным комплексом входа/слияния. Дж. Вирол, 81, 6286–6293. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
  • Ward, B.M. & Moss, B. (2000). Нацеливание сети Гольджи и сигналы интернализации плазматической мембраны в белке оболочки B5R вируса осповакцины. Дж. Вирол, 74, 3771–3780. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
  • Wolffe, E. J., Isaacs, S. N. & Moss, B. (1993). Делеция гена B5R вируса коровьей оспы, кодирующего мембранный гликопротеин массой 42 кДа, ингибирует образование и распространение внеклеточной вирусной оболочки. Дж. Вирол 67, 4732–4741. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
  • Wolffe, E.J., Katz, E., Weisberg, A. & Moss, B. (1997). Ген гликопротеина A34R необходим для индукции специализированных микроворсинок, содержащих актин, и эффективной межклеточной передачи вируса осповакцины. Дж. Вирол, 71, 3904–3915. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]

Здесь представлены статьи из Журнала общей вирусологии, любезно предоставленные Обществом микробиологии


Антарктида до 1900 | National Library of Scotland

Barne Glacier,
Antarctica

James Wordie

Благодаря привилегии обязательного экземпляра и ряду подарков Национальная библиотека Шотландии накопила обширную коллекцию печатных материалов об Антарктике и субантарктических регионах, особенно в отношении их открытия и исследования.

Основой этой коллекции является Коллекция Уорди, личная библиотека сэра Джеймса Манна Уорди, которая была завещана библиотеке в 1958 году. продолжайте покупать как в альпинизме, так и в полярных областях: см. коллекцию Грэма Брауна.

Антарктида — самый холодный, ветреный и, благодаря толщине ледяного покрова, самый высокогорный континент. Это пятый по величине из континентов. Антарктика была ареной многих героических открытий, исследований и выживания, но она также стала важной лабораторией для мирных научных исследований, регулируемых уникальной правовой системой, основанной на Договоре об Антарктике, которая гарантирует, что суверенитет континента не будет нарушен. к таковому любого отдельного государства.

Путешествие вокруг неведомой земли

Капитан Кук

Хотя французские исследователи XVIII века Буве и Кергелен открыли субантарктические острова, которые должны были быть названы в их честь, именно капитан Джеймс Кук инициировал систематическое исследование Антарктиды во время второго своего кругосветного плавания в 1772-1775 гг. Он совершил первое пересечение Южного полярного круга, совершил первое кругосветное плавание вокруг антарктического континента и достиг крайнего юга (71º 10′). Восприимчивая публика жаждала рассказов об экзотических путешествиях, и первое издание рассказа Кука о его путешествии «Путешествие к Южному полюсу…» [Шкафовый знак библиотеки: RB.m.179; Wordie.1722] был распродан в день появления.

Однако его публикации предшествовал несанкционированный «Журнал путешествия Резолюции…» члена экипажа Джона Марры [GB/A.2686], который был первой опубликованной книгой, содержащей фактический отчет об антарктических регионах.

Ближе к континенту

Хотя Кук обогнул Антарктиду, он так и не увидел сам континент. Эта честь, вероятно, выпала русскому адмиралу Фадеусу Беллинсгаузену в его кругосветном путешествии 1819 г.-1821 г., когда он совершил кругосветное плавание ближе к побережью, чем Кук. Однако его экспедиция осталась малоизвестной за пределами России, поскольку переводы его повествования были опубликованы гораздо позже. («Forschungsfahrten im sudlichen Eismeer» [Wordie.385(64)] и «Путешествие капитана Беллинсгаузена в антарктические моря, 1819-1821» [Сер.38/39)].

Многие ранние открытия в антарктическом регионе были сделаны в результате коммерческой деятельности по охоте на тюленей, и именно во время охоты на тюленей Джеймс Уэдделл воспользовался исключительным безледным годом, чтобы отправиться дальше всего на юг (74º 15′) в 1823 году. .(‘Путешествие к Южному полюсу…’ [К.188.e; Wordie.188)].

Три большие экспедиции

В последующие десятилетия три национальные экспедиции, организованные для проведения географических и исследовательских работ, внесли огромный вклад в изучение Антарктиды. Во время своего путешествия 1837–1840 годов французский исследователь Жюль Дюмон д’Юрвиль исследовал значительную часть антарктического побережья, которое он назвал Землей Адели в честь своей жены. Сборники включают его 10-томный отчет «Voyage au pole sud» [Wordie.299-308] и первый том «Atlas pittoresque» [Wordie. 1661].

Джеймс Росс

С 1838 по 1842 год лейтенант Чарльз Уилкс возглавлял пять кораблей Исследовательской экспедиции Соединенных Штатов в южные океаны. Это была не самая подготовленная экспедиция, да и не особенно хорошо ею руководили. Ему действительно удалось нанести на карту около 1200 миль антарктического побережья. Уилкс был первым, кто провозгласил сушу континентом в своем «Рассказе об исследовательской экспедиции Соединенных Штатов…» [E.134/2.a].

Кульминацией этих национальных исследовательских путешествий стала британская экспедиция 1839 года.-1842 г. под руководством опытного арктического моряка, шотландца Джеймса Кларка Росса. Он проник в море Росса, открыл шельфовый ледник Росса и Трансантарктические горы и проплыл дальше всего на юг (78º), который не превышался до 1900 года. Рассказ Росса об экспедиции «Путешествие открытий и исследований в южных и антарктических регионах …’ хранится в Библиотеке[K.187.c; Wordie.237-38], как и «Flora Antarctica» [Am. 2], подготовленный Джозефом Хукером, помощником хирурга экспедиции.

Возобновление процентов

После разоблачений национальных экспедиций исследовательский интерес к Антарктиде угас и существенно не возрождался до последнего десятилетия века. Интересы коммерческого китобойного промысла послужили мотивом как для Дандиской экспедиции 1892–1893 гг. — «Из Эдинбурга в Антарктику…» [K.151.d; Wordie.256] — и под руководством Хенрика Булля в 1894–1895 гг. — «Круиз Антарктики к южным полярным регионам» [K.151.d; Уорди.253]. Эти путешествия не были экономически успешными, но они помогли стимулировать новый интерес к региону, усиленный Международным географическим конгрессом 189 г.5 нацелены на Антарктиду для возобновления исследования.

Первые шаги

Корабль Росса
«Эреб»

Первой из многочисленных национальных экспедиций была экспедиция под руководством бельгийского морского офицера Адриана де Жерлаша с 1896 по 1899 год. научное исследование и была первой экспедицией, выдержавшей антарктическую зиму, когда корабль экспедиции застрял в паковых льдах.

Регулировк

Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *